实验准备
培养基配制:
准备不同类型的培养基,如伊红美兰琼脂培养基、营养琼脂培养基、乳糖胆盐液体培养基等。
按照配方准确称量培养基成分,溶解于蒸馏水中。
将配制好的培养基分装到适当的容器中,如试管、培养皿等。
灭菌:
使用高压蒸汽灭菌器对培养基进行高压蒸汽灭菌,通常在121°C、15 psi(约1.05 kg/cm²)的条件下灭菌15至20分钟。
对实验器材,如培养皿、移液管、试管等,进行干热灭菌,通常在160°C至180°C的条件下灭菌2小时。
采样与培养
采样:
从肉制品中取适量样本,通常为25克。
将样本加入到含有225毫升已灭菌的乳糖胆盐液体培养基的试管中。
培养:
将接种后的试管放入生化培养箱中,设置适当的温度(通常为36°C±1°C)。
培养时间通常为18至24小时。
观察产气情况与稀释
观察产气:
培养结束后,观察试管中的产气情况,记录阳性管数。
系列稀释:
对样本进行系列稀释,以便于后续的微生物分离。常用的稀释液包括生理盐水、磷酸盐缓冲液等。
划线与涂布
平板划线法:
使用无菌接种环,在已灭菌的琼脂培养基表面划线,通过划线来稀释和分离微生物。
涂布平板法:
将系列稀释后的样本涂布在琼脂培养基表面,使用无菌涂布器均匀涂布。
鉴定
菌落观察:
观察培养基上的菌落特征,如大小、形状、颜色、光泽等。
革兰氏染色与镜检:
对疑似菌落进行革兰氏染色,并在显微镜下观察其形态和染色特性,以鉴定是否为特定菌种(如大肠菌群)。
菌种保藏
将分离纯化后的菌种转移到适当的保藏介质中,如琼脂斜面、甘油管等,并存放在低温(如-80°C)冰箱中,以备后续使用。
这些步骤为一般的肉制品菌群测定流程,具体操作时可能需要根据实验目的、所使用的培养基和仪器设备等因素进行调整
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