菌种保藏是指保持微生物菌株的活力和遗传性状的技术。微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚至死亡,因而常常造成菌种的衰退。菌种保藏的目的就是使菌株存活、不丢失、不污染杂菌、不发生或少发生变异,保持菌种原有的活性和各种特征。菌种保藏的基本原理是使微生物的生命活动处于半休眠状态,也就是将微生物的新陈代谢作用限制在低范围内。
菌种保藏的方法很多,但原理大同小异。
首先要挑选优良纯种。利用微生物的孢子、芽孢及营养体;
其次,根据其生理、生化性,人为创造低温、干燥或缺氧等条件,抑制微生物的代谢作用,使其生命活动降低到极低的程度或处于休眠状态,从而延长菌种生命以及使菌种保持原有的形状,防止变异。不管采用哪种保藏方法,在菌种保存过程中要求不死亡、不污染杂菌和不退化。
短期:斜面保藏
斜面保藏是目前常用的短期保藏法,操作简单,使用方便,但需定期接种。因此工作量较大,而且传代次数多易发生变异,因此,仅适用于短期经常使用的菌种。
1. 配制培养基,营养成分浓度稍低为宜,特别是糖类尽可能降低,产酸菌种,则应添加少量碳酸钙;
2. 斜面装液量,斜面以倾斜后不超过试管长度1/2为宜;
3. 斜面培养,温度较最适稍低,时间较最适略长;
4. 生长完成后,密封置于2~8℃的低温培养箱中保藏。每传代一次,霉菌、放线菌及有芽孢的细菌可保存1~3个月,酵母菌2个月,细菌1个月。
活化使用:
将斜面从低温培养箱中取出,细菌挑取菌落增菌,或霉菌切块传代培养,培养好即可使用。
长期:冷冻保藏
冷冻保藏是目前使用较为广泛的长期保藏法之一,适用于所各类微生物,较之于斜面保藏,减少了工作量,延长了保藏时间。
1. 准备斜面或平板新鲜培养物一个,10%的无菌甘油溶液;
2. 用甘油溶液将菌体或孢子洗脱下来,形成菌悬液;
3. 菌悬液分装,冻存管装液1mL/支,后置于程序降温盒;
4. 将程序降温盒置于-80℃冰箱冻存;
5. 可保藏1-2年。
活化使用:
1. 将冻存菌株置于冻存盒中取出,准备水浴溶解,切勿常温融化;
2. 将菌株迅速置于水浴速溶,细菌40℃,真菌30℃,约 2min全部溶解后接种到适宜培养基;
3. 采用适宜条件培养完成即可。
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