1． 用含 20 ％～ 40 ％小牛血清的 RPMI-1640 培养液将巨噬细胞配成 2 × 10⁶ ～ 4 × 10⁶ /ml 的浓度。以每平方厘米 2 × 10⁵ ～ 4 × 10⁵ 个巨噬细胞的密度将细胞悬液接种到玻璃培养皿（瓶）或塑料培养皿（瓶）中。 37 ℃ 5 ％ CO₂ 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养 1 小时或 24 小时。 1 小时培养节省时间但会丢失一些粘附力弱的巨噬细胞，而 24 小时可以得到较多的巨噬细胞。 20 ％～ 40 ％的小牛血清可以减少 B 淋巴细胞的粘附。

2． 摇晃培养皿（瓶），悬浮未粘附细胞，吸出细胞悬液。用预温的 Hanks 液洗涤细胞 3 ～ 4 次。悬浮细胞可重复粘附，得到更多巨噬细胞。用适量含 2.5mmol/L EDTA 的无钙镁 Hanks 液消化细胞 37 ℃ 15 ～ 30 分钟。用吸管吹打分离细胞，离心 250 × g 10 分钟，去上清液。

3． 用预冷的 Hanks 液洗涤细胞 3 ～ 4 次，每次离心 250 × g 10 分钟，去上清液。最后用含 10 ％小牛血清的 RPMI-1640 培养液悬浮细胞，台盼蓝染色计数细胞并决定细胞活力，将细胞配成所需的浓度。