1. 用含 20 %~ 40 %小牛血清的 RPMI-1640 培养液将巨噬细胞配成 2 × 106 ~ 4 × 106 /ml 的浓度。以每平方厘米 2 × 105 ~ 4 × 105 个巨噬细胞的密度将细胞悬液接种到玻璃培养皿(瓶)或塑料培养皿(瓶)中。 37 ℃ 5 % CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养 1 小时或 24 小时。 1 小时培养节省时间但会丢失一些粘附力弱的巨噬细胞,而 24 小时可以得到较多的巨噬细胞。 20 %~ 40 %的小牛血清可以减少 B 淋巴细胞的粘附。
2. 摇晃培养皿(瓶),悬浮未粘附细胞,吸出细胞悬液。用预温的 Hanks 液洗涤细胞 3 ~ 4 次。悬浮细胞可重复粘附,得到更多巨噬细胞。用适量含 2.5mmol/L EDTA 的无钙镁 Hanks 液消化细胞 37 ℃ 15 ~ 30 分钟。用吸管吹打分离细胞,离心 250 × g 10 分钟,去上清液。
3. 用预冷的 Hanks 液洗涤细胞 3 ~ 4 次,每次离心 250 × g 10 分钟,去上清液。最后用含 10 %小牛血清的 RPMI-1640 培养液悬浮细胞,台盼蓝染色计数细胞并决定细胞活力,将细胞配成所需的浓度。
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