实验所需仪器：超净台、离心机、高压灭菌锅、电热恒温培养箱、磁力搅拌器、培养皿、涂布器、移液管、移液器

实验所需试剂：牛肉高蛋白胨培养基相关试剂、硫酸卡那霉素水溶液（50mg/ml）、生理盐水

2.2实验方法

2.2.1制备培养基 

　　普通培养基——牛肉高蛋白胨培养基（400ml）：

牛肉高5g蛋白胨10gnacl5g琼脂20g蒸馏水1000mlph7.0

　　按配方配制好培养基后置于灭菌锅中115℃15min，倒平板，4皿*15ml*5组+2皿*15ml=22皿*15ml=330ml

　　筛选培养基(200ml)：含抗生素50mg/L。（卡那霉素属于氨基糖苷类抗生素，能结合细菌核糖体的30s亚基上的16srRnA，阻断细菌蛋白质的合成。）

　　牛肉高5g蛋白胨10gnacl5g琼脂20g蒸馏水1000mlph7.0硫酸卡那霉素水溶液（50mg/ml）0.2ml，按配方先不要加硫酸卡那霉素配制然后115℃15min灭菌，取出培养基后冷却至60℃时将硫酸卡那霉素0.2ml加入培养基中，充分震荡混匀，倒平板，2皿*15ml*5组+2皿*15ml=12皿*15ml=180ml2.2.2制备菌悬液（106~108个/mL）

　?、俟烫迮嘌捍蟪Ω司呋蛲坎冀又钟诠烫迮嘌?，37℃培养24-48h。

　?、诰海河檬柿可硌嗡蜗淳?，倒入一个无菌小三角瓶（或试管）中，充分振荡使菌

　　体散开，得到菌悬液。

　?、劬号ǘ扔醚蚣剖寮剖?/p>

　　使用细菌计数板或血球计数板在显微镜下直接计数。将菌液滴在血球计数板0．1ml的计数格中，细菌被固定染色后，在显微镜下选择数出若干个小格中的细菌数目，（一般数125个小格），根据比例关系折算出单位体积菌液中细菌的数量。

　　血球计数板规格：计数格=4*4=16大格1大格=5*5=25小格

　　小格体积=0.05*0.05*0.1=0.00025mm3=2.5*10-7ml(长*宽*高)

　　计算方法例如：125格中90个细菌，则（90÷125）÷（2.5*10-7）个/ml=2.88*106所以，125格中的细菌大约在31(4格1个菌)—3125（每个小格25个菌）个。2.2.3诱变处理及接种

　?、俳贤獾拼蚩?，预热30min；

　?、谌∥蘧嘌螅?Phi;90mm，含无菌大针），加入稀释好的菌悬液8ml以覆盖培养皿底面为宜。

　?、劢淼呐嘌笾糜谟毡湎淠诘拇帕涟枰巧?，开启磁力搅拌仪旋纽进行搅拌1分钟，然后打开皿盖，分别处理10s、20s、40s、80s、160s（可以累积照射），照射完毕后先盖上皿盖，再关闭搅拌和紫外灯；

　　④每个照射剂量分别取0.5ml分别稀释1000倍和100倍，然后取稀释液0.1ml

　　做普通培养基的涂布培养，每个处理两个重复；同时每个照射剂量取0.1ml照射液直接做两个筛选培养基的涂布培养。⑤对照涂布培养：将照射的菌液稀释1000倍，在稀释液中取0.1ml做2个普通培

　　养基涂布培养，2个筛选培养基的涂布培养。涂布要均匀，培养基表面无液流。⑥37℃培养24h后，计数，统计分析。对于筛选的抗性菌种进行验证、纯化。

　　2.2.4.结果计数、分析、统计及讨论

　?、僖苑涫奔湮嶙?，以存活菌落数的lg值为纵坐标，作紫外线对大肠杆菌致死效应曲线。

　　②列公式计算不同辐射剂量下的致死率。

　　照射前活菌数/ml?照射后活菌数/ml

　　照射前活菌数/ml

　?、奂扑悴⒈冉喜煌浼亮肯麓蟪芨司目挂┩槐渎?，并分析不同辐射剂量的诱变效果差异原因

　　突变率=筛选平板菌数/普通平板菌数*100%④抗药性菌株的筛选与纯化

　　将一抗性克隆划线到一新的抗性平板上，与对照菌相比较，观察生长状况